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文库/载体构建


       旷远生物除在SNP分型领域有专攻之外,在分子生物学实验及重组蛋白制备方面都有着丰富的经验,以重组蛋白制备为依据,为客户提供可靠的分子生物学技术服务,主要包括:基因克隆载体构建定点突变(单点及多点突变)及质粒大量制备


       ◆表达系统选择及方案设计
       根据客户所需的要求,推荐最适合的表达系统(大肠杆菌/酵母/昆虫细胞/哺乳动物细胞表达系统);

       根据客户选择的表达系统,推荐密码子优化方案;

       设计最佳的表达载体构建及相应的蛋白纯化方案;

       提供客户:各种建议方案


      ◆获取目标基因DNA序列
       从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列;

       从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列;

       合成设计好的基因序列或通过基因克隆的方式获得基因序列;

       提供客户:目标基因(在T载体或常规克隆载体上)及测序报告


      ◆表达载体构建

      选定的标签序列/Tag (可选用的Tag见下表)按同一读码框融合于标基因的5',3'端,也可利用载体上自带的标签序列而无需另外添加。

 

标签序列/Tag列表

Taq名称

 用途

HIS

亲和纯化

GST

亲和纯化

MBP

亲和纯化

Nus

增加蛋白可溶性

trxA

提高蛋白表达量

Myc

表达检测

FLAG

表达检测

HA

表达检测

GFP等荧光蛋白

表达检测

 

      将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上;

      测序验证构建质粒的准确性;

      可提供的表达载体(若需特殊的表达载体或启动子序列,需由客户提供);

 

大肠杆菌表达体系载体

Expression Vector

 Promoter

 载体所含Tag

pET3a, pET11a, pET24a

T7/ac

None or T7 Tag

pET32a

T7/ac

TRX & HIS

pET41a

T7/ac

GST & HIS

pET22b, pET25b, pET26b

T7/ac

Secret

pET28a, pET15b, pRSETb

T7/ac

HIS

pET50b, pET43a

T7/ac

Nus, HIS

pPEPTIDE

T7/ac

HIS

pMAL-c2x

T7/ac

MBP

pGEX4T, pGEX5X, pGEX6P

T7/ac

GST

pQE30

T5

HIS

pTrcHisB

Trc

T7, HIS

pTWIN

T7/ac

Intein, CBD

pBV220

PRPL

None

酵母表达体系载体

Expression Vector

 Promoter

 载体所含Tag

pPICZα

AOX1

 

pPIC9K

AOX1

 

PGAPZα

GAP

 

昆虫细胞表达体系载体

Expression Vector

 Promoter

 载体所含Tag

Bacmid DNA

 

 

哺乳动物细胞表达体系载体

Expression Vector

 Promoter

 载体所含Tag

pcDNA3.1

CMV

 

pcDNA4.0

CMV

 

EGFP

CMV

a EGFP

      提供客户:正确构建的重组表达质粒,含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。


      ◆质粒大规模柱纯化服务
      采用国外进口的DNA纯化填料,可为客户提供高纯度质粒,
      提供客户:纯化质粒务